为荧光探针匹配尼康荧光滤光块【译自:MicroscopyU】

现代荧光显微镜仪器结合了干涉滤光片和双色分光镜片,以满足用于标记样本的荧光探针的激发和发射的要求。如果这些组件选择恰当,显微镜将为样本荧光团的选择性激发,以及随后分离出成像所必须的弱得多的发射荧光提供了一种必不可少的机制。仔细的将激发和发射滤片的属性,以及二向色镜的功能与被标记样本的特征相匹配,可以在黑色背景上以最大的敏感度进行成像。该交互式教程使用户可以在当前尼康的荧光滤光块中确定最佳的选择,以最大化特定荧光探针的激发和发射效率。

 

 

操作该教程,首先从窗口右侧的“Nikon Filter Set”下拉菜单中选择一组滤光块。接着从“Probe Class”下拉菜单中选择所用荧光染料的族类。对于每一类探针,都提供了一组荧光团,可以通过“Fluorophore”的下拉菜单进行访问。(小贴士:为了更快捷的操作,在选择所需的荧光探针后,可以通过向上和向下的箭头键快速切换滤光块的选择。)

 

该教程以蓝光吸收的荧光探针(Alexa Fluor 488)的光谱图进行初始化,叠加上匹配的一组尼康滤光块的光谱特性,最终显示在标题为“Spectral Profiles”的图像中。所选的荧光团的激发和发射光谱的标准化强度以图像右侧的纵坐标(Relative Intensity)标示,而左侧的纵坐标则标示所选滤光片组各部件的光谱透过率(Transmittance)。光谱截面由蓝色和浅红色阴影分别标识激发和发射的重叠区域。激发截面(蓝色)对应荧光团的吸收和激发滤光片透过区域的重叠,发射截面(红色)则表示荧光团的发射和发射滤片透过区域的重叠。每一个截面的重叠着色都可以通过“Excitation”和“Emission”复选框逐个打开或关闭。当“Fluorophore Spectra”中的复选框被关闭,同样会去除荧光团的“Absorption” 和/或“Emission”相应的颜色阴影。滤光块每一部件的光谱同样可以通过“Filter  Spectra”复选框中的复选标记分别移除。激发片、二向色镜、发射片的透射曲线被分别用蓝色、绿色和红色进行颜色编码,并可以使用相应的复选框切换开或关。请注意,重要的滤光片光谱参数和用于荧光探针激发和发射的波长峰值也显示在滤光片和探针的复选框旁边。

 

 

撰稿人:

Adam Rainey and Michael W. Davidson – National High Magnetic Field Laboratory, 1800 East Paul Dirac Dr., The Florida State University, Tallahassee, Florida, 32310.

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